透射电镜

透射电镜实验技术

一、透射电子显微镜结构和成像原理

透射电子显微镜结构包括两大部分：主体部分为照明系统、成像系统和观察照相室；辅助部分为真空系统和电气系统。

一、透射电镜的应用

透射电子显微镜在材料科学、生物学上应用较多。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，样品的密度、厚度等都会影响到最后的成像质量，必须制备更薄的超薄切片，通常为50～100nm。所以用透射电子显微镜观察时的样品需要处理得很薄。

常用的方法：超薄切片法、冷冻超薄切片法、冷冻蚀刻法、冷冻断裂法等。对于液体样品，通常是挂预处理过的铜网上进行观察。

三、实验材料

PHILIPS TECNAI-10透射电子显微镜，2.5%戊二醛，细胞培养液（含10%血清），胰酶（使用时浓度为0.1%，含0.02%EDTA，制备时即取100mg胰酶和20mgEDTA溶于100mLPBS溶液，并在无菌操作台上用一次性过滤器过滤）、PBS、6孔板、离心管等细胞培养常用物品。

四、透射电镜样本制备实验步骤

A．细胞处理步骤

用6孔板或培养瓶培养细胞，待细胞生长达到60%-70%，吸出旧培养基，根据实验需要加药或外界刺激处理，最后用胰酶消化并收集细胞，1000r/min离心5min，弃上清，加PBS混匀，并转移1.5mlEP管中，1000r/min离心10min，轻轻吸去PBS，加1ml2.5%戊二醛，此时不要混匀吹打，使细胞成团聚集，上下倒置细胞不散开为最好，4℃保存。

样品送检，包埋，上机观察拍照。

胰酶消化步骤：先吸除培养瓶中旧培养基，用PBS洗2次，加入胰酶消化液约0.5ml，晃动使消化液铺均匀，置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入1-2ml完全培养基后，轻轻吹打，收集细胞至离心管，1000转/min离心5min，弃上清，即得到细胞沉淀。

B．微生物处理步骤

收集微生物沉淀，加PBS混匀，并转移1.5mlEP管中，1000r/min离心20min（时间较细胞处理的时间长），轻轻吸去PBS，加1ml2.5%戊二醛，此时不要混匀吹打，使成团聚集，上下倒置细胞不散开为最好，4℃保存。

样品送检，包埋，上机观察拍照。

C．组织块处理步骤

取材。将组织切成1mm左右的方块贮存于1.5mlEP管中。加1ml2.5%戊二醛， 4℃保存。

样品送检，包埋，上机观察拍照。

结果展示：