激光共聚焦

激光共聚焦显微镜

一、激光共聚焦显微镜

激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。主要系统包括激光光源、自动显微镜、扫描模块（包括共聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器）、数字信号处理器、计算机以及图象输出设备（显示器、彩色打印机）等。通过激光扫描共聚焦显微镜，可以对观察样品进行断层扫描和成像。因此，可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。同时，通过激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、多重免疫荧光标记和离子荧光标记观察的有力工具。

仪器名称：激光共聚焦显微镜

英文名：Leica TCS SP2 AOBS

型号与规格：TCS SP2 AOBS

二、激光共聚焦显微镜组成

1、共聚焦扫描系统
（1）独立双向扫描镜。可以在正置显微镜和倒置显微镜之间迅速互换。仪器永久不用校正；可调的计算机控制单共焦针孔、孔径20～600μm
（2）光谱扫描区400～850nm
（3）单线扫描频率≥2000线/秒
（4）图扫描率≥3幅/秒512×512pixels；≥20幅/秒512×32pixels
（5）扫描分辨率4096*4096扫描放大1～32X；多方位序列扫描方式；任意形状区域扫描-范围：≥22mm。
（6）光谱斜陡率   ≤1％
（7）透射光检测器用于微分干涉相衬法检验
（8）低噪音 冷却型光电倍增管（PNT）控测器12bi
2、激光装置
具有多通道AOTF（四通道，八谱线），连接四种不同波长的可见光激光可以自动选择激光谱线和功率，具等待功能。光纤耦合连接低能量激光。目前使用五激光，八谱线。Ar激光发生器 （458nm/5mw，476nm/5mw，488nm/20mw，514nm/20mw）-蓝；He/Ne激光发生器（543nm/1.2mw）-绿；He/Ne激光发生器（633nm/10mw，594nm/2mv）-红，紫外激光发生器（405nm/25mv）
3、显微镜：DMIRE2倒置电动荧光显微镜，拥有10x，20x，40x干镜以及63x，100x油镜。配置电动编码物镜转座，Z轴电动驱动和干涉相衬的编码棱镜转轮。
4、计算机工作站
WindowsXP操作系统，8个同步接收器通道，12bit同步数字转换，超宽的SCSI电脑介面，高性能的电脑工作站，两个监视器，计算机彩色显示

主要附件和功能：

观察细胞精细结构。用于检测各种染色，非染色和荧光标记的组织和细胞等，在可见光范围内荧光的定位定量分析，组织光学切片，基因染色体定位，基因亚细胞定位，离子通道研究．

三、检测的优势

    与传统光学显微镜相比，主要解决了生物样品结构相互重叠影响观察的问题，并可形成清晰的三维图象。在检测方面的主要优势有：

    1、对活细胞和组织或细胞切片进行连续扫描，可获得精细的单个或一群细胞或者观察到局部组织的各个层面结构（包括细胞特异结构—细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统，样品的深层结构）的三维图像。

    2、细胞内离子荧光标记，单标记或三奈记，检测细胞内如PH和钠、钙、镁等离子浓度的比率测定及动态变化。

    3、荧光标记探头标记的活细胞或切片标本的活细胞生物物质，膜标记、免疫物质、免疫反应、受体或配体，核酸等观察；可以在同一张样品上进行同时多重物质标记，同时观察；

    4、荧光检测快、激发光强度精确控制、光漂白和荧光淬灭作用小；

    5、对细胞检测无损伤、精确、准确、可靠和优良重复性；数据图象可及时输出或长期储存。

四、样品要求

样品制备无特殊要求；各种染色、非染色、荧光标记的组织（包括活组织）、培养细胞、粘附细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片。

五、应用领域

1、细胞生物学：细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化、细胞凋亡；

2、生物化学：酶、核酸、FISH（荧光原位杂交）、受体分析

3、药理学：药物对细胞的作用及其动力学；

4、生理学：膜受体、离子通道、细胞内离子含量、分布、动态；

5、遗传学和组胚学：细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断；

6、神经生物学：神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递、递质受体、离子内外流、 神经组织（如大脑皮质）结构、细胞分布；

7、微生物学和寄生虫学：细菌、寄生虫形态结构（表面和内部结构）；

8、病理学及病理学临床应用：活检标本的快速诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病的诊断，HIV，宫颈上皮细胞涂片诊断；

9、生物学、免疫学、环境医学和营养学；