海马神经元细胞的原代培养方法

脑组织置于一含预冷解剖液的（PBS)培养皿中，小心剥离并去除脑膜及脉络丛。

在中线处用尖镊分离大脑半球。

在解剖显微镜下去除嗅球、中隔、丘脑及下丘脑，剥离脑膜及脉络丛。

在大脑皮层下方小心取出海马。

收集全部海马碎片，置于含有0.25%胰蛋白酶溶液的离心管中，该溶液必须在37℃孵箱中预暖。

在孵化箱中消化5-7min。

收集全部海马碎片，置于10ml预暖的DMEM培养基的试管中。

最好用培养基洗2-3遍，以终止消化反应。

加少量培养基于试管中，反复吹打10-15次，重悬细胞。

取少量细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液按比例混合。

用细胞计数板计算存活和死亡的细胞数，从而测定细胞密度。

根据实验需要，以培养基稀释细胞悬液至所需的细胞密度。

接种细胞至经多聚赖氨酸铺板过夜处理的培养皿或培养板中。

待6-8h细胞贴壁后，换培养基（为含2%的Neurobasal）。

培养36h后加入阿糖胞苷以抑制胶质细胞的分裂生长。

小结：

1.取材过程中要在冰上完成，尽量在8分钟内取出海马。

2.注意液体需要预冷或预热到37℃。

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